GDF{0}}mg/viaal soodustab märkimisväärselt lihasmassi ja -jõu paranemist

GDF{0}}mg/pudeli tuuma tutvustus

Müostatiin|Transforming Growth Factor{0}} Superperekonnaliige 1mg/viaal

Üldnimetus: müostatiin (kasvu diferentseerumisfaktor-8)

Ingliskeelne nimi: müostatiin (kasvu diferentseerumistegur 8, GDF-8)

Valgu struktuur: Küpsed peptiidid on homodimeerid, kus iga ahel sisaldab ligikaudu 110 aminohapet.

Molekulmass: umbes 25 kDa (monomeerne vorm)

Puhtus: suurem või võrdne 90% (SDS-PAGE/HPLC)

Sisu: 1mg/pudel

Välimus: Valge lüofiliseeritud pulber

Säilitamine: Külmutage temperatuuril -80 kraadi, kaitske valguse eest ja hoidke kuivas kohas.

Kasutus- ja ladustamisjuhend

GDF-8 (müostatiin):

GDF-8, transformeerivate kasvufaktorite- superperekonna liige, väljendub peamiselt skeletilihastes. Lihaskasvu negatiivse regulaatorina kontrollib see täpselt skeletilihaste massi, seondudes aktiviini retseptori IIB/ALK4/5 signaalirajaga, inhibeerides müoblastide proliferatsiooni ja diferentseerumist. Lihaste kasvu peamise negatiivse tagasiside signaalvalguna mängib see keskset rolli lihaste arengu, regeneratsiooni, atroofia (nagu vähikahheksia ja vanusega seotud sarkopeenia) ja ainevahetushaiguste eksperimentaalsetes mudelites. Võrreldes anabolismi soodustavate teguritega pakuvad selle negatiivsed regulatiivsed omadused ainulaadse perspektiivi lihaste homöostaasi tasakaalumehhanismide mõistmiseks.

Tänu oma üliolulisele negatiivsele regulatiivsele rollile lihaste kasvus kasutavad GDF{2}}8 laialdaselt lihasbioloogia, regeneratiivse meditsiini, treeningfüsioloogia ja ainevahetushaiguste teadlased. Võrreldes geenide väljatõrjumise mudelitega on selle rekombinantse valgu vorm standardiseeritud eksperimentaalne tööriist inhibeerivate signaalide intensiivsuse täpseks kontrollimiseks, annuse -vastuse ja ajaprotsesside uurimiseks in vitro ja in vivo. Selle rakendamine lihaste regenereerimise häirete, lihaste atroofia mudelite ja lihas-rasva interaktsioonidega seotud metaboolsete uuringute uuringutes loob aluse võimalike sekkumisstrateegiate hindamiseks, mis on suunatud GDF-8 rajale.

GDF-8 rakendused:

Klassikalise lihaskasvu negatiivse regulaatorina kasutatakse seda in vitro ja in vivo mudelites lihaskasvu inhibeerivate signaalide täpseks simuleerimiseks või suurendamiseks, uurides seeläbi selle pärssivat mõju müoblastide proliferatsioonile, diferentseerumisele, skeletilihaste massile ja funktsioonidele. Seda kasutatakse peamiselt lihaste atroofia, kahjustatud lihaste regeneratsiooni ning lihaste ja teiste kudede (nt rasv ja luu) vahelise koostoime uurimiseks.

Seda kasutatakse laialdaselt lihasatroofia mudelites, müoblastide/satelliitrakkude funktsiooni uuringutes, lihaste regenereerimise katsetes ning rasvumise ja diabeediga seotud lihaste ainevahetushäirete uuringutes. Selle standardiseeritud rekombinantse valgu vorm on põhiline uurimistööriist uudsete -lihase atroofiavastaste ravimite hindamiseks, treeningutega kohanemise molekulaarse aluse uurimiseks ja GDF-8 signaaliülekandele suunatud ravistrateegiate uurimiseks.

Kasutus- ja säilitusmeetodid

1. Lahustamine ja valmistamine:

Soovitatav lahusti:

Eelistatud lahusti: Lahjendage äädikhappe lahus pH-ga 4,0-5,0 (nt 20 mM äädikhape).

Võtmekandja: Kandjavalk tuleb lisadalahusti ja kõik lahjendid;soovitatav on kasutada steriilset äädikhappelahust, mis sisaldab 0,1% veise seerumi albumiini (BSA).

Töölahuse lahjendamine: Lahjendada füsioloogilise pH-nisteriilne PBS või rakukultuuri sööde, mis sisaldab 0,1–1% BSA-d.

Absoluutselt keelatud: Valkude otsene lahustamine või lahjendamine puhta vee, neutraalse PBS-i või kandjavalkudeta lahustega on rangelt keelatud,vastasel juhul toimub valkude pöördumatu agregatsioon, sadestumine ja inaktiveerimine.

Standardne ettevalmistusprotseduur:

Lahusti valmistamine:

Valmistage 20 mM steriilne äädikhappe lahus, mis sisaldab 0,1% BSA-d (või kõrgema puhtusastmega kandevalku) ja filtreerige see läbi 0,22 μm filtermembraani.

Enne kasutamist tuleb lahustit{0}}jääl eeljahutada.

Rekonstitueerimisprotseduur:

Tehke protseduur jääl. Lisage 1 mg viaali 1,0 ml eeljahutatud happelist kandevalgulahustit.

Kasutage mikropipetti, et süstida proov väga aeglaselt mööda pudeli seina, vältides õhumullide teket või otsest mõju külmkuivatatud{0}}koogile.

Asetage viaal jääle japöörake seda õrnalt horisontaalselt 5-10 minutitkuni pulber on täielikult lahustunud.Ärge segage, raputage, puhuge peale ega raputage tugevalt.

Lõppkontsentratsioon: 1 mg/mL (ligikaudu 40 μM) happeline põhilahus.

Doseerimine ja gradientlahjendus:

Jagage kohe ühekordseteks annusteks 2-10 μL, kasutades jääl madala adsorptsiooniga silaniseeritud tsentrifuugitorusid.

Lahjendamisel lahjendage happelist põhilahust pH neutraliseerimiseks esmalt vähemalt 100 korda PBS-i või 0,1–1% BSA-d sisaldava söötmega. Näiteks võtke 1 μL põhilahust ja lisage see 99 μL PBS-ile, mis sisaldab 1% BSA-d, et saada vahelahus 10 ug/ml.

Seejärel lahjendatakse vahelahus lõpliku töökontsentratsioonini. Kõik lahjendamise etapid viiakse läbi jääl.

Selgelt märgistatud: GDF-8, kontsentratsioon, pH, valmistamiskuupäev, partii number, säilitustemperatuur.

Töökontsentratsiooni viide:

In vitro rakukatsed: Tavaliselt kasutatav kontsentratsioonivahemik on 0,1–5 ug/mL (ligikaudu 4–200 nM), mida tuleb optimeerida vastavalt rakutüübile ja katse eesmärgile.

In vivo loomkatsed: Annustamine tuleb rangelt kindlaks määrata vastavalt mudelile ja manustamisviisile (nt intraperitoneaalne, intramuskulaarne, intravenoosne) kirjanduse põhjal. Tavaliselt kasutatav vahemik on vahemikus ug/kg kuni mg/kg jatuleb teha eelkatsed.

Arvutamise näide: 100 ng/mL töölahuse valmistamiseks võtke 1 μL 10 ug/mL vahelahust ja lisage see 100 μL söötmele.

Peamised punktid, mida tähele panna:

Madal temperatuur ja õrnus: Kogu protsess tuleb läbi viia jääl ja liigutused peavad olema äärmiselt õrnadvalkude denaturatsiooni vältimiseks.

Happe sunnitud lahustamine: See tuleb lahustada happelises puhverlahuses (pH 4-5), mis on selle lahustuvuse ja aktiivsuse säilitamiseks ülioluline.

Sunnitud kandjavalgud: Lahustamine ja lahjendamine tuleb läbi viia lahustega, mis sisaldavad kandevalke nagu BSAadsorptsiooni ja agregatsiooni vältimiseks.

Külmutamise{0}}sulatustsükkel on rangelt keelatud: Korduvad külmutamise{0}}sulatustsüklid on rangelt keelatud; lahus tuleb väljastada ühe korraga. Lahjendatud töölahusei tohi ladustada; see tuleb kohe ette valmistada ja ära kasutada.

Seisundi jälgimine: Pärast lahustamist peab lahus olema selge ja kergelt opalestseeruv. Flokulentse aine, osakeste või hägususe olemasolu näitab, et valk on denatureerunud ja agregeerunud ning lahus tuleb ära visata.

2. Säilitustingimused:

Lahustamata lüofiliseeritud pulber:

Ainult ladustamine: -80 kraadi (sügavkülm). Mitte hoida temperatuuril -20 kraadi.

Säilivusaeg: 12 kuud -80 kraadi juures.

Hoida rangelt valguse eest: Hoida originaalses heledas{0}}alumiiniumfooliumkotis, mille sees on kuivatusaine.

Valmislahus:

Kohene väljastamine:Väljastaminetuleb täita 5 minuti jooksulpärast lahustamist.

Ümberpakendatud ja külmutatud: Säilitada ainult -80 kraadi juures, maksimaalne säilivusaeg 2 nädalat, ladustamiseks ei soovitata.

Säilitamine on rangelt keelatud: Lahjendatud töölahus peabei tohi salvestadaja seda tuleb hoida jääl ja kasutada ära 4 tunni jooksul.

Transporditingimused:

Seda tuleb transportidaallkuiv jää(-78 kraadi) tingimustes.

Pakendil peab olema piisavalt kuiva jääd ja isolatsiooni, et see ei sulaks kogu protsessi vältel.

3. Stabiilsus- ja töötlemisstandardid:

Füüsikalis-keemiline stabiilsus:

See on pH-tundlik jaon stabiilne ja lahustuv ainult happelise pH juures (4,0-5,0). See agregeerub ja sadestub kergesti neutraalse ja aluselise pH juures.

See on äärmiselt tundlik termilise ja mehaanilise pinge (pööris, võnkumine, mullimine) ja korduvate külmumis{0}}sulatustsüklite suhtes.

See on pinna adsorptsiooni suhtes tundlik, seetõttu tuleb kasutada kandevalku ja madala{0}}adsorptsiooniga mahutit.

Bioaktiivsuse säilitamine:

neli põhimõtet: "happeline lahustumine, kandjakaitse, madalate{0}}temperatuuri õrnus ja range külmumis{1}}sulatustsüklite keeld.

Vajamidagi, võtke ühendustmeie

Kuum tags: gdf-8 1mg/viaal soodustab märkimisväärselt lihasmassi ja -jõu paranemist, Hiina gdf-8 1mg/viaal edendab märkimisväärselt lihasmassi ja jõu suurendamise tootjaid, tarnijaid, tehaseid